1. 胰岛素的生产方法有哪些提取 胰脏提取
你好
1.提取目的基因:
既从人的DNA中提取胰岛素基因,可使用限制性内切酶将目的基因从原DNA中分离.
2.提取质粒:
使用细胞工程,培养大肠杆菌,从大肠杆菌的细胞质中提取质粒,质粒为环状.
3.基因重组:
取出目的基因与质粒,先利用同种限制性内切酶将质粒切开,再使用DNA连接酶将目的基因与质粒"缝合",形成一个能表达出胰岛素的DNA质粒.
4.将质粒送回大肠杆菌:
再大肠杆菌的培养液中加入含有Ca+的物质,如CaCl2,这使细胞会吸收外源基因.此时将重组的质粒也放入培养液中,大肠杆菌便会将重组质粒吸收.
5.胰岛素的产生:
再大肠杆菌内,质粒通过表达转录与翻译后,便产生出胰岛素蛋白质.通过大肠杆菌的大量繁衍,便可大量生产出胰岛素!
可以借阅高中生物选修1,其中基因工程单元有详细介绍
2. 注射用胰岛素如何生产
一般都是生物合成人胰岛素,通过基因重组技术,利用酵母产生的。
3. 生物工程生产胰岛素的步骤.想解决目的基因如何获取
1,目的基因的获取:通过各种手段(基因文库,化学合成,PCR技术等)获取胰岛素基因
2,基因表达载体的构建:一般采用质粒,用同一种限制酶切割质粒和切取目的基因(胰岛素基因)使产生相同的粘性末端,将切取的胰岛素基因片段插到质粒的切口处,再用DNA连接酶使质粒和胰岛素基因结合成重组质粒
3,将重组质粒导入受体细胞(如大肠杆菌,用感受态细胞法即Ca+处理)
4,检测与鉴定目的基因获得途径:
1限制性内切酶酶切法
2利用PCR技术直接扩增目的基因
3目的基因的化学合成
4通过构建基因组文库或CDNA文库分离目的基因
5反向转录法分离目的基因
希望对你有帮助.
4. 人工合成胰岛素是什么技术
1921年,加拿大多伦多大学的弗雷德里克·班廷和查尔斯·贝斯特从狗的体内分离出一种活性物质——胰岛素。他们把这种物质注入一条患有糖尿病、濒临死亡的狗身上,这条狗的病情很快就出现了好转。
第二年,他们在一名生命垂危的14岁男孩子身上尝试类似的实验成功后,这种激素进入大规模生产。尽管它不能彻底治愈糖尿病,但它是一种重要的救命药物。
人工合成蛋白质是人们向往已久的,也是人类向生物活性、向生命进军的首要方向。蛋白质如果能通过人工合成,那么,它的意义将不仅仅是找到了无机与有机、无生命与有生命的物质之间的关系,而且,将进一步揭示和证实关于生命、灵魂等许多重大问题的认识。由于一些多肽和蛋白质的化学结构,特别是胰岛素的一级结构被陆续认识,通过人工方法合成具有生物活性的多肽和蛋白质的任务,就摆在了世界各国的科学工作者的面前。
就在世界各国的科学家把目光聚集在蛋白质的人工合成问题上时,1958年,中国科学院上海生物化学研究所、上海有机化学研究所以及北京大学的科学家邹承鲁、钮经义、龚岳亭、汪猷、邢其毅等众多科学家联合攻关,向科学高峰发起了冲击。
大家知道,1958年在中国历史上是一个特殊的年代,在一个政治上处于困境、技术上缺乏基础的艰苦环境中,中国的科学家要攻克生命禁区的堡垒谈何容易!科学家的实验所用去的化学溶剂足以灌满一个游泳池,而他们在那些不分昼夜的日子里所洒下的汗水,又何尝不能灌满一个游泳池!
1959年,在各位科学工作者的合力协作下,实现了构成天然胰岛素的A、B两条肽链的拆分和重新组合的工作。在此基础上,北京大学生物系在国内率先合成了具有生物活性的9肽——催产素。接着中国科学院化学研究所和北京大学化学系组织了协作组,经过若干年的艰苦努力,终于在1965年获得了人工合成的牛胰岛素,并制成结晶。这是世界上第一次用人工方法合成的一种具有生物活性的蛋白质,在科学技术和哲学上都具有极其重要的意义,而且为医药工业合成比天然产物更为有效的多肽抗生素、激素等药物开辟了广阔的前景。
发现胰岛素的班廷
人工合成蛋白质的成功,是人类在认识生命、揭开生命奥秘的征途上向前跨进了重要一步。它标志着人工合成蛋白质的时代已经开始了。
人工合成牛胰岛素的成功,说明人类在研究生命的历程中又迈出了一大步。由人工合成胰岛素派生的活性多肽研究也蓬蓬勃勃地发展起来了。已经人工合成的,除了催产素、增血压素、加压素类似物外,还有促黄体素释放激素、促甲状腺素释放激素、胰高血糖素等多肽激素。此外,蛋白质的结构与功能的研究也在深入探索中。
5. 胰岛素生产方法有什么方法可以低成本大量提取的吗
1.提取目基: 既DNA提取胰岛素基,使用限制性内切酶目基原DNA离. 2.提取质粒: 使用细胞工程,培养肠杆菌,肠杆菌细胞质提取质粒,质粒环状. 3.基重组: 取目基与质粒,先利用同种限制性内切酶质粒切,再使用DNA连接酶目基与质粒"缝合",形能表达胰岛素DNA质粒. 4.质粒送肠杆菌: 再肠杆菌培养液加入含Ca+物质,CaCl2,使细胞吸收外源基.重组质粒放入培养液,肠杆菌便重组质粒吸收. 5.胰岛素产: 再肠杆菌内,质粒通表达转录与翻译,便产胰岛素蛋白质.通肠杆菌量繁衍,便量产胰岛素! 借阅高物选修1,其基工程单元详细介
6. 胰岛素可通过发酵技术产生吗
发酵:通过微生物的培养而获得产物的过程。发酵制药种类:(1)微生物菌体发酵(2)微生物酶发酵(3)微生物代谢产物发酵(4)微生物转化发酵
胰岛素可通过发酵技术产生?——这种说法是不正确的。只能说“重组大肠杆菌的高密度发酵是提高基因工程产品产量的一个非常有效的手段“,是现代发酵工程研究的一个热点。大肠杆菌本身没有人胰岛基因.通过基因工程,把人胰岛基因导入大肠杆菌,得到“工程菌”,才能够大量生产人的胰岛素。
重组人胰岛素是第一个应用于临床的基因工程药物,于1982年上市。由于胰岛素没有糖链,大肠杆菌系统生产有2条途径。目前以第二条路线为主。
第一条、是分别在大肠杆菌中合成A链和B链,然后通过化学氧化作用把2条链连接起来形成胰岛素。A和B链基因分别与半乳糖苷酶基因连接,形成融合基因,发酵生产包涵体融合蛋白。用CNBr切除Met-肽键,使A、B链与载体蛋白分开。化学法连接,折叠得到有活性的重组人胰岛素。步骤多,产量低,活性受到限制。
第二条、是生产胰岛素原,然后再酶水解,形成胰岛素。用强启动子高表达载体生产,如色氨酸启动子等。