㈠ 工业化生产乳酸菌的液体培养基的配方
1材料与方法
1.1 材料
1.1.1菌种:鸡源乳酸菌(本研究所分离、鉴定保存)
1.1.2原材料及试剂:酵母粉、葡萄糖、玉米糖浆、微量盐及其他特殊成分;MRS液体培养基,琼脂粉,5NNaOH溶液
1.1.3仪器及设备:三角烧瓶、二重皿、全温振荡培养箱、高压消毒锅、微量移液器、全自动发酵罐等。
1.2方法
1.2.1种子液准备:
取出菌种保藏管用MRS固体培养基划平板进行复苏,37度厌氧培养48h。在平皿上挑取单个菌落接种50mlMRS液体培养基中,在摇床中37度厌氧培养48h。染色、镜检种子液,观察菌体生长情况及有无杂菌生长。
1.2.2正交试验培养基配制;
根据细菌组成的碳氮比来确定原材料的浓度配比,选择5种原材料,确定4个浓度,采用正交表L16(45)共安排16次试验,每个试验配培养基各100ml,调整pH值置150ml三角瓶中消毒,备用。
1.2.3接种与培养:
正交试验种子采用2%接种量,接种后置三角瓶与37度震荡培养。每8h调一次pH值,培养36h用梯度稀释和平板涂布法检测活菌数。
1.2.4发酵中试:
根据正交试验结果,确定配方,采用150升种子罐和1.5吨发酵罐进行中试,培养温度37度,转速120-150转/min,培养时间36-48h,用梯度稀释和平板涂法检测活菌数。
2 结果
2.1通过正交试验,培养36h用梯度稀释和平板涂布法检测活菌数,获得活菌数为70亿/ml、67亿/ml、和66亿/ml的配方。
2.2用3#配方作为大规模中试发酵培养基在全自动发酵罐不中厌氧培养36h,结果活菌数为100~120亿/ml
3 讨论
3.1 本试验采用了正交试验设计法对培养基的原材料进行筛选,该方法能利用有限的试 验获得正确、全面的试验结果,加快了实验进程。
3.2通过正交试验和发酵中试,活菌数超过了实验室培养的菌数,使基质转化率达到35%,降低了生产成本。
工业培养基跟实验室培养基的区别:
只是说原料粗糙度或者说是原料选择的区别,品级不一样而已,要看对于乳酸菌培养的要求了,比如要看是做高密度培养呢,还是直接就获取代谢产物,菌体离心收集后洁净度是否要高,还有就是选择的工艺是否时候使用低品级的工业培养基呢,这些问题需要综合考虑才能最后定论培养基的内容。