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工业上用什么方法去除核酸

发布时间:2022-10-25 07:19:25

‘壹’ 酵母核糖核酸的分离和鉴定。实验原理

一、 实验目的

1、掌握酵母RNA提取的方法。

2、了解核酸的组成。

3、掌握鉴定核酸组分的方法和操作。

二、 实验原理

酵母核酸中RNA含量较多,DNA则少于2%。RNA可溶于碱性溶液,当碱被中和后,可加乙醇使其沉淀,由此即可得到RNA制品。但是用碱液提取的RNA有不同的降解。RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸等组分,加入硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在(见实验内容)

三、 实验步骤

1、 用托盘天平称1g干酵母于研钵中,加入少许石英砂,再加入2ml 0.04mol/LNaOH溶液,在研钵中充分研磨至少5min。

2、 再加4ml 0.04mol/LNaOH溶液于匀浆液中,混匀后,将匀浆液转移到大试管中,再用4ml 0.04mol/LNaOH溶液洗涤研钵,洗涤液并入匀浆液中。

3、 将大试管小心在沸水浴中加热30min,冷却后倒入离心管中,与另一组同学的离心管在托盘天平上平衡,然后两组的离心管对称地放入离心机中,2000r/min下离心15min。

4、 吸取10ml酸性乙醇溶液于小烧杯中,将离心管上清液小心倒入小烧杯中,边倒入边搅拌,直到RNA沉淀完全。

5、 将小烧杯中的液体倒入2个干净的离心管,平衡、离心(2000r/min)3min。

6、 弃去两离心管上清液,各离心管中加入95%乙醇2.5ml,振荡、混匀、平衡、离心(2000r/min)3min。

7、 弃去两离心管上清液,各离心管加入3ml 1.5mol/L硫酸,混匀、倒入同一个大试管中,贴上标签,放在试管架上,备用。

8、 将水解液在沸水浴中加热至少10min,使沉淀RNA充分水解。

9、 取一支试管A,加入1ml 0.1mol/L硝酸银溶液,再逐滴加入浓氨水至沉淀消失,然后加入1ml水解液放置片刻,观察有无白色嘌呤碱的银化合物沉淀。

10、 另取一支试管B,加入水解液1ml,三氯化铁浓盐酸溶液2ml和地衣酚乙醇溶液0.2ml(约4滴),混匀,用试管夹夹好后放到沸水浴中3~5min,注意观察溶液是否变成绿色,说明核糖的存在。

11、 再取一支试管C,加入水解液1ml和定磷试剂1ml,混匀,在沸水浴中加热,注意观察溶液颜色的变化,溶液变蓝,说明磷酸存在。

注意事项:离心一定要平衡对称放入离心机中,离心机达到设置转速时才能离开。

四、 实验结果

第6步中离心管底部有不少的RNA沉淀。

试管A:出现白色浑浊现象。有嘌呤碱存在。

试管B:加热后,出现鲜绿色,且随着加热时间延长,颜色越来越深。有核糖存在。

试管C:加热后,出现蓝色,且随着加热时间延长,颜色越来越深。有磷酸存在。

说明RNA的组分中有嘌呤碱、核糖、磷酸。

分析:

本实验选用酵母,是因为酵母中RNA含量较多,且价格便宜。RNA可溶于碱性溶液,所以本实验用0.04mol/LNaOH溶液来提取。RNA不溶于乙醇,可用酸性乙醇使RNA从溶液中沉淀出来,再用乙醇洗涤沉淀,可得到RNA粗制品。

研磨和NaOH使酵母细胞破裂,RNA主要存在于细胞质中,所以RNA被释放出来,同时,NaOH使蛋白质变性。

加入酸性乙醇,一方面可以中和NaOH,另一方面,使RNA从溶液中沉淀下来。

RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸等组分,加入硫酸煮沸可使其水解,从水解液中可以测出上述组分的存在。

(1)、强酸使核酸分子的有机磷消化为无机磷,使之与钼酸铵结合成磷钼酸铵(黄色沉淀)
PO43- + 3NH4+ + 12MoO42- + 24H+ ===(NH4)3PO4.12MoO3.6H2O + 6H2O

当有还原剂(如维生素C)存在时,Mo6+被还原成Mo4+,再与试剂中的其它MoO42-结合成Mo(MoO4)2,呈蓝色,称钼蓝。所以试管C中会出现蓝色。

(2)、RNA与硫酸共热,生成的核糖进而脱水转化为糠醛,三氯化铁作为催化剂,可与地衣酚反应,生成绿色化合物,所以试管B中出现绿色。(OR苔黑酚)

(3)、嘌呤碱可与硝酸银反应产生白色的飘零银化合物沉淀。所以试管A中出现浑浊现象。

(4)、不检测嘧啶碱,是因为与嘌呤碱相比,它难以被水解下来,同时它难检测且现象不明显。

(1)工业上用什么方法去除核酸扩展阅读

酵母核酸提取原理

提取和制备RNA 的首要问题是选RNA 含量高的材料。微生物是工业上大量生产核酸的原料,其中RNA 的提制以酵母最为理想,因为酵母核酸中主要是RNA(2.67~10.0%),DNA 很少(0.03~0.516%),而且菌体容易收集,RNA 也易于分离。

RNA 提制过程首先要使RNA 从细胞中释放,并使它和蛋白质分离,然后将菌体除去。再根据核酸在等电点时溶解度最小的性质,将pH 调至2.0~2.5,使RNA 沉淀,进行离心收集。然后运用RNA 不溶于有机溶剂乙醇的特性,以乙醇洗涤RNA 沉淀。

提取RNA 的方法很多,在工业生产上常用的是稀碱法和浓盐法。浓盐法是在加热的条件下,利用高浓度的盐改变细胞膜的透性,使RNA 释放出来,此法易掌握,产品颜色较好。

使用浓盐法提出RNA 时应注意掌握温度,避免在20~70℃之间停留时间过长,因为这是磷酸二酯酶和磷酸单酯酶作用的温度范围,会使RNA 因降解而降低提取率。在90~100℃条件下加热可使蛋白质变性,破坏磷酸二酯酶和磷酸单酯酶,有利于RNA 的提取。

‘贰’ 简述核酸分离的基本 原理

通过机械磨碎细胞或加入表面活性剂裂解细胞使内容物提取出来,再加入蛋白变性剂变性沉淀蛋白质。最后靠核酸在醇溶液中溶解度下降的特点提取纯的核酸。

‘叁’ 生物分离高手进

这写起来复杂了....... 很多地方都有这样的实验步骤啊,我看了一下 下面这个,还可以
酶的分离简单,就是麻烦,时间挺长的

酶的分离纯化方法简介
生物细胞产生的酶有两类:一类由细胞内产生后分泌到细胞外进行作用的酶,称为细胞外酶。这类酶大都是水解酶,如酶法生产葡萄糖所用的两种淀粉酶,就是由枯草杆菌和根酶发酵过程中分泌的。这类酶一般含量较高,容易得到;另一类酶在细胞内产生后并不分泌到细胞外,而在细胞内起催化作用,称为细胞内酶,如柠檬酸、肌苷酸、味精的发酵生产所进行的一系列化学反应,就是在多种酶催化下在细胞内进行的,在类酶在细胞内往往与细胞结构结合,有一定的分布区域,催化的反应具有一定的顺序性,使许多反应能有条不紊地进行。
酶的来源多为生物细胞。生物细胞内产生的总的酶量虽然是很高的,但每一种酶的含量却很低,如胰脏中期消化作用的水解酶种类很多,但各种酶的含量却差别很大。
因此,在提取某一种酶时,首先应当根据需要,选择含此酶最丰富的材料,如胰脏是提取胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、淀粉酶和脂酶的好材料。由于从动物内脏或植物果实中提取酶制剂受到原料的限制,如不能综合利用,成本又很大。目前工业上大多采用培养微生物的方法来获得大量的酶制剂。从微生物中来生产酶制剂的优点有很多,既不受气候地理条件限制,而且动植物体内酶大都可以在微生物中找到,微生物繁殖快,产酶量又丰富,还可以通过选育菌种来提高产量,用廉价原料可以大量生产。
由于在生物组织中,除了我们所需要的某一种酶之外,往往还有许多其它酶和一般蛋白质以及其他杂质,因此为制取某酶制剂时,必须经过分纯化的手续。
酶是具有催化活性的蛋白质,蛋白质很容易变性,所以在酶的提纯过程中应避免用强酸强碱,保持在较低的温度下操作。在提纯的过程中通过测定酶的催化活性可以比较容易跟踪酶在分离提纯过程中的去向。酶的催化活性又可以作为选择分离纯化方法和操作条件的指标,在整个酶的分离纯化过程中的每一步骤,始终要测定酶的总活力和比活力,这样才能知道经过某一步骤回收到多少酶,纯度提高了多少,从而决定着一步骤的取舍。

酶的分离纯化一般包括三个基本步骤:即抽提、纯化、结晶或制剂。首先将所需的酶从原料中引入溶液,此时不可避免地夹带着一些杂质,然后再将此酶从溶液中选择性地分离出来,或者从此溶液中选择性地除去杂质,然后制成纯化的酶制剂。下面就酶的分离纯化的常用方法作一综合介绍:
一、预处理及固液分离技术
1.细胞破碎(cell disruption)
高压均质器法:此法可用于破碎酵母菌、大肠菌、假单胞菌、杆菌甚至黑曲霉菌。将细胞悬浮液在高压下通入一个孔径可调的排放孔中,菌体从高压环境转到低压环境,细胞就容易破碎。菌悬液一次通过均质器的细胞破碎率在12%-67%。细胞破碎率与细胞的种类有关。要达到90%以上的细胞破碎率,起码要将菌悬液通过均质器两次。最好是提高操作压力,减少操作次数。但有人报道,当操作压力达到175Mpa时,破碎率可达100%。当压力超过70Mpa时,细胞破碎率上升较为缓慢。高压均质器的阀门是影响细胞破碎率的重要因素。丝状菌会堵塞均质器的阀门,尤其高浓度菌体时更是如此。在丰富培养基上比在合成培养基上生长的大肠菌更难破碎。
容菌酶处理法:蛋清中含有丰富的溶菌酶,价格便宜,常用来裂解细胞。具体做法是:溶壁微球菌(micrococcus lysodeikticus)43kg,置于0.5%的氯化钠溶液中,使细胞浓度为5%(干重),在35℃用0.68kg(干重)的蛋清处理20min,得到的细胞碎片用相同体积的乙醇处理,用离心机将细胞碎片和胞内蛋白质除去,再将乙醇浓度提高到75%(体积分数),可以得到纯度为5%的过氧化氢酶1500g。
2.离心
离心分离过程可分为离心过滤、离心沉淀、离心分离3种类型,所使用的设备有过滤式离心机、沉降式离心机和离心机。过滤式离心机的转鼓壁上开有小孔,壁上有过滤介质,一般可用于处理悬浮固体颗粒较大、固体含量较高的场合。沉降式离心机用于分离固体浓度较低的固液分离,如发酵液中的菌体,用盐析法或有机溶剂处理过的蛋白质等。分离机用于分离两种互不相溶的、密度有微小差别的乳浊液或含微量固体微粒的乳浊液。
在生物领域采用的离心机系统,除了应具备离心机的一般要求外,还应满足生物生产的技术要求,这包括灭菌、冷却、密封,以保证产品不受污染并不污染环境。现代哦离心机装置包括以下三个步骤,并进行程序控制:离心、离心系统的灭菌及就地清洗。如阿法-拉伐公司离心机产品的装置,具有双重轴向密封,密封由装在转筒主轴上下的碳化硅动环和固定环组成,密封由水连续冷却和润滑,可防止产品被污染,也可防止生产过程中排出的废物对环境的污染。该离心机又如一个密闭的压力容器,可在121℃温度下进行蒸汽灭菌,该离心设备设有环绕离心机转筒的冷却夹套,对悬浮液和浓缩的固体都能进行充分的冷却,并能有效地控制温度,这对于生物制品是非常重要的。如BTPX205型离心机可用于细胞收集、培养液的净化和细胞碎片的分离,可用于疫苗、酶制剂等的提取。该机的其他辅助系统及控制系统也较为完善,如设有压力指示器、力量计、温度传感器和液面传感器。
3.膜分离技术
在蛋白质纯化过程中主要用到的膜分离技术多为超滤。在静压作用下降溶液通过孔径非常小的滤膜,使溶液中分子量较小的溶质透过薄膜,而大分子被截留于膜表面。大多数超滤膜是由一层非常薄的功能膜与较厚的支撑膜结合在一起而组成的。功能膜决定了膜的孔径,而支撑膜提供机械强度以抵抗静压力。超滤浓缩的优点是:操作条件温和,无相变化,对生物活性物质没有破坏。
超滤系统主要由料液贮罐、泵、超滤器、透过液收集罐组成,料液经泵打入超滤器,水及低分子量物质排出超滤器外,被浓缩的料液在料液贮罐、泵、及超滤器中循环。当料液浓缩至一定的倍数后即可作为进一步处理的浓缩料液。
超滤应用于蛋白质类物质的浓缩和脱盐过程中时应注意以下问题:第一,在超滤循环过程中,由于泵和叶轮与料液的摩擦放热作用,料液的温度会逐渐升高,会造成蛋白质分子的损失。因此,料液贮罐应加冷却系统,并安装自动测温及控制系统。第二,某些酶的辅助因子散失为问题:一些酶含有辅助因子,其分子量小,超滤时易从透过液中排除掉,因而在超滤前或超滤后要添加一定浓度的的辅助因子。
还可将超滤与亲和层析相结合以提高分离纯度。其工作原理是:当溶液中欲被分离的蛋白质不受阻碍地通过超滤膜的孔隙时,如果在膜的一侧结合着亲和配基,该蛋白质就会与配基结合因而结聚在膜的这一侧。不与配基结合的其他物质就将穿过孔而被带走。再用适宜的洗脱剂将该蛋白质洗脱下来,洗脱液用于进一步的分离纯化。
4.泡沫分离
原理:将气体通入含多种组分的溶液中,由于这些组分的表面活性由差异,因此在溶液的表面,某些组分将形成泡沫,泡沫的稳定性取决于操作条件及溶液的生物学特性。泡沫中含有更多的表面活性成分,故泡沫的组分种类及其含量与溶液中的不相同。这样,溶液中的组分舅得以分离。
蛋白质较易吸附与气液界面,这有利于其结构的稳定。泡沫分离过程是:蛋白质从主体溶液中扩散到气液界面,该过程可能是可逆的也可能是不可逆的;分子发生重排,一般认为在空气-水界面会形成两种类型的膜,一种是稀膜,另一种是浓膜,可能会发生由多个分子聚集在一起的现象。在气液界面形成的蛋白质膜可以是单层的也可以是多层的。膜的类型取决于主体溶液及气液界面上蛋白质的特性、结构和浓度。
泡沫分离的目的,一方面提高酶蛋白的富集率(泡沫中蛋白质的浓度/最初溶液中蛋白质浓度),另一方面提高酶蛋白的提取率(泡沫中蛋白质的提取率/最初的蛋白质质量),或使多组分混合物中某一组分的分配系数最大。

二、抽提
沉淀
1. 盐析
常用的盐析剂是硫酸铵,其溶解度大、价格便宜。硫酸铵沉淀蛋白质的能力很强,其饱和溶液能使大多数的蛋白质沉淀下来。对酶没有破坏作用。
pH的控制:应从酶的溶解度与稳定性两个方面考虑,在酶等电点时其溶解度最小易沉淀,但有些酶再等电点时稳定性较差,因此要选择最佳pH值.一般要求在酶最稳定的pH值的前提下再考虑最适宜酶沉淀的pH值。在操作中一旦确定最佳pH值后,在添加硫酸铵之前甲酸或碱调节好酶液的pH值,要尽量避免溶液pH值的波动以免破坏酶的稳定性。在添加硫酸铵时要注意搅拌,并注意硫酸铵的加入速度,一般是由少到多,缓慢加入,硫酸铵尽可能磨成细粉。
温度的控制:有些酶在较高温度下稳定性能较好,可在常温下进行盐析操作,而对于大多数酶,尽可能在低温下操作。
酶液的净置:加完硫酸铵后,酶液要静置一段时间,使酶蛋白完全沉淀下来,酶静置后,就不要再加以搅拌。
2.有机溶剂沉淀
有机溶剂选择:可用于酶蛋白沉淀的有机溶剂包括醇类物质等,如甲醇、乙醇、异丙醇。乙醇的亲水性能较好,可防止蛋白质的变性,酶蛋白在其中的溶解度也较低。
有机溶剂沉淀操作:有机溶剂一般都使蛋白质变性,当温度较高时变性蛋白质分子就会变成永久失活。因此用有机溶剂处理时最好在0℃以下进行。用有机溶剂沉淀得到的酶蛋白不要放置过久,要尽快加水溶解。
3.聚合物絮凝剂沉淀
聚合物絮凝剂,如葡聚糖和聚乙二醇,与酶分子争夺水分子,具有脱水作用使酶沉淀。聚乙二醇作为一种沉淀剂的优点是在水溶液中,其浓度可达到50%,浓度为6%-12%的蛋白质大都可以沉淀下来。这种试剂不需要低温操作,而且对蛋白质的稳定还有一定的保护作用。聚乙二醇不会被吸附,故在离子交换吸附前不必去除。
4.用金属离子和络合物沉淀
酶和其他蛋白质都会形成金属盐,其溶解度较低。用金属离子沉淀的缺点是酶与金属离子相互作用后,可逆变化较差,尤其是用巯基衍生物,它结合的]金属离子会催化酶变性而失活。
5.用特殊试剂沉淀法
用链霉素可选择性去除核酸,从而使胞内酶沉淀出来。链霉素盐(浓度为0.5-1.0mg/mg蛋白质)对于选择性沉淀核酸的效果比锰离子还要好,酶不易失活。
6.亲和沉淀
将亲和反应的高度选择性、低处理量特性与沉淀操作的大处理量、地选择性有机结合形成了亲和沉淀技术。将配基与可溶性载体偶联后形成载体-配基复合物,该复合物与生物分子结合后在一定条件下可以沉淀出来。
配基-载体复合物可以选择性地与蛋白质结合,溶液中的pH值、离子强度及蛋白质浓度等条件对亲和结合的影响力并不大,只有竞争性的配基会降低产物与原配基的亲和结合力,甚至使亲和结合发生逆转。
引导产生沉淀的方法有:离子交联;加入带相反电荷的聚合物;加入带相反电荷的疏水基团;改变pH值,诱导产生疏水沉淀;温度诱导产生沉淀。
亲和结合:将亲和配基加入到含有目的物蛋白质的溶液中,调节好有关沉淀的条件,使之有利于亲和结合。
洗涤:为经过处理的粗制液中发生亲和沉淀可能会发生非特异性结合,尤其是使用带电的聚合物,离子交换的效应将使其他蛋白质共同沉淀,因此在分离目的物之前要洗涤沉淀物。其做法是:加入适当的清洗剂重新溶解沉淀,再沉淀;或在专一性洗脱之前,彻底清洗沉淀。在上述过程中要始终保持目的蛋白质与配基处于亲和结合状态。
配基-载体复合物与目的蛋白质的分离:分离结束之后,要确保回收目的蛋白质和配基-载体复合物,目的蛋白质要达到一定的纯度,回收率要高。

‘肆’ 核酸提取或纯化技术主要有哪几类

核酸提取或纯化技术主要有三类:

1、传统方法(操作复杂,耗时长)

2、离心柱法(试剂盒)

3、磁珠法(可单独采购磁珠或买成品试剂盒)

其中,磁珠法可实现自动化操作,是目前比较主流的方法。

核酸提取应用在疾病控制中心、临床疾病诊断、输血安全、法医学鉴定、环境微生物检测、食品安全检测、畜牧业和分子生物学研究等多种领域。



(4)工业上用什么方法去除核酸扩展阅读:

核酸提取的注意事项:

1、仪器的安装环境:正常的大气压(海拔高度应该低于3000m)、温度20-35℃、典型使用温度25℃、相对湿度10%-80%、畅通流入的空气为35℃或以下。

2、避免将仪器放置在靠近热源的地方,如电暖炉;同时为防止电子元件的短路,应避免水或者其他液体溅入其中。

3、进风口和排风口均位于仪器背面,同时避免灰尘或纤维在进风口聚集,保持风道的畅通。

4、核酸提取仪离其他竖直面至少10cm。

5、仪器接地:为了避免触电事故,仪器的输入电源线必须接地。

6、远离带电电路:操作人员不得擅自拆解仪器,更换元件或进行机内调节必须有持证的专业维修人员完成,不要在接通电源的情况下更换元件。

‘伍’ 蛋白纯化怎么去除核酸

1、根据所选蛋白的性质,选择合适的介质和条件,想办法把蛋白结合在柱子上,(有tag的话用这个方法最好了),然后用高盐(0.5-3M NaCl)洗,一般会洗下来一个峰,就是被洗下来的核酸了。
2、试试在高盐条件下加Mn2+,因为高盐可以让核酸和蛋白分离,而Mn2+对核酸沉淀有一定的效果。
但是要十分小心的是,这类蛋白本身的天然性质就是要结合核酸的,有的时候核酸去除干净了,蛋白也沉淀了,所以没那么容易,很多小条件要结合所选的蛋白自己去摸索。

‘陆’ 核酸的分离方法有什么

核酸(nucleic acid)是遗传信息的携带者,是基因表达的物质基础.无论是进行核酸结构还是功能研究,首先需要对核酸进行分离和纯化.核酸样品质量将直接关系到实验的成败.核酸分离、纯化原则:1.保持核酸分子一级结构的完整性.因为遗传信息全部储存在一级结构之中,核酸的—级结构还决定其高级结构的形式以及和其他生物大分子结合的方式.2.分离核酸原则:1)温度不要过高;2)控制pH值范围(pH值5-9); 3)保持一定离子强度; 4)减少物理因素对核酸的机械剪切力.
在核酸分离提取中最重要的是要防止核酸的生物降解,细胞内或外来的各种核酸酶能消化核酸链中的磷酸二酯键,破坏核酸一级结构.所用器械和一些试剂需高温灭菌,提取缓冲液中需加核酸酶抑制剂.
常用的DNA酶抑制剂有1.金属离子螯合剂:如EDTA-Na2(乙二胺四乙酸二钠)、8-羟基喹啉.2.阴离于型表面活性剂如SDS,该试剂除对核酸酶有抑制作用外,还能使蛋白质变性,并与变性蛋白结合成带负电荷的复合物,该复合物在高盐溶液中沉淀.
常用的RNA酶(RNAase)抑制剂有:1.皂土(bentonite )作用机制:皂土带负电荷,能吸附RNase,使其失活.2. DEPC(二乙基焦碳酸盐) (C2H5OCOOCOOC2H5)粘性液体,很强的核酸酶抑制剂.作用机制:与蛋白质中His结合使蛋白变性.

‘柒’ 如何除实验室核酸污染

实验室去除核酸污染推荐采纳欧菲姆OXY-30000的过氧化氢干雾消毒方案,它巧妙地利用了特殊的干雾灭菌设备+诺福过氧化氢杀孢子剂(高纯低浓度)的完美配合,组成无懈可击的空间清洁消毒方案。
而过氧化氢消毒技术当中,据大数据得知,采用全球领先干雾技术打造的欧菲姆OXY-30000消毒机,是行业专业消毒去除PCR核酸污染的佼佼领航者。OXY-30000精妙之处在于其专业的解决方案,避免了过氧化氢蒸汽的腐蚀性以及解决了扩散性问题。其特点为:1、灭菌效果好,生物指示剂挑战降低6lg对数值,能彻底杀灭环境中的MRSA、VRE、结核分枝杆菌、芽孢、病毒和多重耐药的革兰阴性菌(鲍曼不动杆菌);2、活性氢氧基团能氧化DNA、RNA污染源及核酸酶等分子物质,而诺福过氧化氢杀孢子剂中的活性银离子,可以抑制DNA聚合酶等有害病菌的生长,从而更有效的防止外源DNA的干扰;
3、1.5小时完成灭菌,人员可进入。预防核酸实验室环境空气污染及核酸片气溶胶污染,及快速高效去除实验室核酸污染源;4、小于3微米干雾气体,扩散性优越,能扩散到每一个角落,空气中做布朗运动,消毒干雾无孔不入,专门对付小分子核酸污染源物质;
具备国际化的CNAS检测报告和消毒产品备案,可以提供完善的符合欧盟GMP要求的验证文件和报告。

‘捌’ 核蛋白中的核酸是怎么去除的

可以在大肠杆菌裂解的时候就加入核酸酶,通过核酸酶消化胞内的核酸,当核酸变成小片段的时候就很容易被去除掉。 利用阴离子交换层析 Q 来去除核酸,Q柱对于核酸有很强的吸附作用,需要很高的盐浓度才能洗脱下核酸,可以很容易的去除蛋白溶液中的核酸。 利用分子筛去除核酸,核酸是大分子物质,一般会在分子筛的外水体积中被去除掉。

‘玖’ 用苯酚处理并离心后RNA溶于上层被酚饱和的水相中,为什么加入冷乙醇可以析出RNA

于RNA的来源和种类很多,因而提取制备方法也很各异。一般有苯酚法、去污剂法和盐酸胍法。其中苯酚法又是实验是最常用的。组织匀浆用苯酚处理并离心后,RNA即溶于上层被酚饱和的水相中,DNA和蛋白质则留在酚层中。向水层加入乙醇后,RNA即以白色絮状沉淀析出,此法能较好的除去DNA和蛋白质。上述方法提取的RNA具有生性。
工业上常用稀碱法和浓盐法提取RNA,用这两种方法所提取的核酸均为变性的RNA,主要用作制备核苷酸的原料,其工艺比较简单。浓盐法使用10%左右氯化钠溶液,90℃提取3-4h,迅速冷却,提取液经离心后, 上清液用乙醇沉淀RNA。稀碱法使用稀碱使酵母细胞裂解,然后用酸中和,除去蛋白质和菌体后的上清液用乙醇沉淀RNA或调pH2.5利用等电点沉淀。
酵母含RNA达2.67-10.0%,而DNA含量仅为0.03-0.516%,为此,提取RNA多以酵母为原料。
RNA含有核糖、嘌呤碱、嘧啶碱和磷酸各组分。加硫酸煮可使RNA水解,从水解液中可用定糖,定磷和加银沉淀等方法测出上述组份的存在。

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