㈠ 工業化生產乳酸菌的液體培養基的配方
1材料與方法
1.1 材料
1.1.1菌種:雞源乳酸菌(本研究所分離、鑒定保存)
1.1.2原材料及試劑:酵母粉、葡萄糖、玉米糖漿、微量鹽及其他特殊成分;MRS液體培養基,瓊脂粉,5NNaOH溶液
1.1.3儀器及設備:三角燒瓶、二重皿、全溫振盪培養箱、高壓消毒鍋、微量移液器、全自動發酵罐等。
1.2方法
1.2.1種子液准備:
取出菌種保藏管用MRS固體培養基劃平板進行復甦,37度厭氧培養48h。在平皿上挑取單個菌落接種50mlMRS液體培養基中,在搖床中37度厭氧培養48h。染色、鏡檢種子液,觀察菌體生長情況及有無雜菌生長。
1.2.2正交試驗培養基配製;
根據細菌組成的碳氮比來確定原材料的濃度配比,選擇5種原材料,確定4個濃度,採用正交表L16(45)共安排16次試驗,每個試驗配培養基各100ml,調整pH值置150ml三角瓶中消毒,備用。
1.2.3接種與培養:
正交試驗種子採用2%接種量,接種後置三角瓶與37度震盪培養。每8h調一次pH值,培養36h用梯度稀釋和平板塗布法檢測活菌數。
1.2.4發酵中試:
根據正交試驗結果,確定配方,採用150升種子罐和1.5噸發酵罐進行中試,培養溫度37度,轉速120-150轉/min,培養時間36-48h,用梯度稀釋和平板塗法檢測活菌數。
2 結果
2.1通過正交試驗,培養36h用梯度稀釋和平板塗布法檢測活菌數,獲得活菌數為70億/ml、67億/ml、和66億/ml的配方。
2.2用3#配方作為大規模中試發酵培養基在全自動發酵罐不中厭氧培養36h,結果活菌數為100~120億/ml
3 討論
3.1 本試驗採用了正交試驗設計法對培養基的原材料進行篩選,該方法能利用有限的試 驗獲得正確、全面的試驗結果,加快了實驗進程。
3.2通過正交試驗和發酵中試,活菌數超過了實驗室培養的菌數,使基質轉化率達到35%,降低了生產成本。
工業培養基跟實驗室培養基的區別:
只是說原料粗糙度或者說是原料選擇的區別,品級不一樣而已,要看對於乳酸菌培養的要求了,比如要看是做高密度培養呢,還是直接就獲取代謝產物,菌體離心收集後潔凈度是否要高,還有就是選擇的工藝是否時候使用低品級的工業培養基呢,這些問題需要綜合考慮才能最後定論培養基的內容。